|
همسانهسازی، بیان، تخلیص و بررسی فعالیت اندولیزین فاژ KP27 کلبسیلا پنومونیه در سیستم بیانی pET28a(+)
|
زینب زارع   ، مهدی ایمانی*  ، صفیه آقازاده |
| بخش بیوشیمی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران |
|
|
چکیده: (315 مشاهده) |
زمینه و هدف: اندولیزین فاژ KP27 پروتئینی با جرم مولکولی 14/7 کیلو دالتون است که دارای فعالیت اندوپپتیدازی علیه دیواره سلولی باکتریها می‌باشد. به‌دلیل وجود تحقیقات محدود روی اندولیزین KP27 و همچنین برتری آن در برابر شرایط محیطی سخت مثل دما و pH هدف از این مطالعه تولید نوترکیب و بررسی فعالیت ضدباکتریایی آن علیه دو باکتری گرم منفی و مثبت اشرشیاکلی و استافیلوکوک اورئوس می‌باشد.
روش‌ها: ژن اندولیزین KP27 بین دو آنزیم محدودکننده NcoI و XhoI در پلاسمید pET-28a(+) همسانهسازی شد. تولید در باکتری E. coli BL21 (DE3) و تخلیص توسط کروماتوگرافی Ni2+-NTA سفاروز انجام شد. جهت بررسی فعالیت ضدباکتری اندولیزین از تستهای فعالیت باکتریکشی، MIC، MBC و فعالیت آنزیمی از تخریب دیواره سلولی استفاده شد. آنالیز آماری و رسم نمودارها توسط نرمافزار گراف پد پریسم انجام شد.
یافته‌ها: اندولیزین KP27 با موفقیت همسانهسازی و با راندمان بالا به مقدار 28/5 میلی‌گرم/لیتر محیط کشت تولید شد. میزان کشندگی آن علیه باکتریهای اشرشیاکلی و استافیلوکوک اورئوس در غلظتهای بالاتر از 4 ماکروگرم/لیتر بیشتر از 50 درصد بود. میزان MIC و MBC آن به ترتیب 16 و 64 ماکروگرم/لیتر برای اشرشیاکلی و 8 و 32 ماکروگرم/لیتر برای استافیلوکوک اورئوس به دست آمد. بررسی فعالیت تخریب دیواره سلولی اندولیزین حاکی از کاهش ۲۰ درصد کدورت محلول پس از نیم ساعت مجاورت با اندولیزین بود.
نتیجه‌گیری: باتوجه‌به مقدار بیان و تولید بالای اندولیزین KP27 و همچنین فعالیت بالای آن در برابر دو باکتری گرم منفی و گرم مثبت مورد مطالعه، میتوان آن را گزینه مناسبی برای پژوهشهای کاربردی و متعاقب آن صنعتی شدن به جای آنتی‌بیوتیک‌ها پیشنهاد داد.
|
|
| واژه‌های کلیدی: اندولیزین KP27، باکتریوفاژ، پروتئین نوترکیب، دیواره سلولی، مقاومت آنتی بیوتیکی |
|
|
متن کامل [PDF 1015 kb]
(135 دریافت)
|
|
نوع مطالعه: پژوهشي اصیل |
موضوع مقاله:
سایر موارد
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
