|
طراحی سازه بیانی حاوی ژن دیس اینتگرین شناسایی شده از ترانسکریپتوم عقرب همیسکورپیوس لپتوروس و بررسی عملکرد آن در مدل برون تنی
|
سحر ابوالقاسمی   ، مهدی بهدانی ، فاطمه کاظمی لمعه دشت*  |
| آزمایشگاه ونوم و بیومولکول های درمانی، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران |
|
|
چکیده: (409 مشاهده) |
زمینه و هدف: چسبندگی سلول نقش مهمی در تهاجم سلولهای سرطانی ایفا میکند. دیس‌اینتگرینها ابزار درمانی مناسبی برای سرطان محسوب میگردند. هدف از این مطالعه کلونینگ و بیان ژن دیساینتگرین شناسایی شده از ترانسکریپتوم زهر عقرب همیسکورپیوس لپتوروس در میزبان باکتریایی و بررسی عملکرد آن در مدل برون‌تنی می‌باشد.
روش‌ها: در ابتدا ساختارهای اول، دوم و سوم پروتئین دیس اینتگرین با استفاده از ابزار بیوانفورماتیک مورد بررسی قرار گرفت. سپس ژن سنتز و در وکتور pET-22b کلون شد. سازه بدستآمده به میزبان باکتری اشریشیا کلای BL-21 ترانسفورم شد. بیان پروتئین توسط نیم میلی مولار ایزوپروپیل-بتا-D-تیوگالاکتوپیرانوسید القا شد. بیان با استفاده از ژل سدیم دودسیل سولفات-پلی آکریل آمید و وسترن بلات بررسی و تایید شد. پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی میل ترکیبی نیکل در شرایط دناتوره خالص‌سازی شد. پس از خالص‌سازی، پروتئین با حذف تدریجی اوره از طریق دیالیز دوباره تا شد. پس از بیان پروتئین و خالص سازی، اثر مهاری دیس اینتگرین بر بقا و مهاجرت رده‌های سلولی HUVEC به ترتیب با استفاده از روش MTT و Transwell مورد بررسی قرار گرفت.
یافته‌ها: نتایج تجزیه و تحلیل ساختاری نشان داد که ساختار پیش‌بینی‌شده دیساینتگرین ویژگی‌های معمولی را نشان می‌دهد و با الگوهای ساختاری مورد انتظار مشاهده‌شده در پروتئین‌های دیساینتگرین مطابقت دارد. بالاترین سطح بیان پروتئین با غلظت ایزوپروپیل-بتا-D-تیوگالاکتوپیرانوسید 0/5 میلی مولار و انکوباسیون 5 ساعته مشاهده شد. وزن مولکولی پروتئین بیان شده تقریباً 12 کیلو دالتون بود. دیس اینتگرین رشد سلول های HUVEC را با 50 IC37 میکروگرم در میلی لیتر پس از یک دوره انکوباسیون 48 ساعته مهار کرد. علاوه بر این، دیساینتگرین خالص شده، مهاجرت 70 درصد از سلولهای HUVEC را به سمت منبع فاکتور رشد اندوتلیای عروقی، در مقایسه با گروه کنترل بدون دیس اینتگرین، مهار کرد.
نتیجه‌گیری: نتایج حاکی از پتانسیل دیساینتگرین در مهار رشد و مهاجرت سلولهای اندوتلیال انسان می باشد.
|
|
| واژه‌های کلیدی: ترانسکریپتوم، دیساینتگرین، عقرب همیسکورپیوس لپتوروس |
|
|
متن کامل [PDF 969 kb]
(144 دریافت)
|
|
نوع مطالعه: پژوهشي اصیل |
موضوع مقاله:
علوم اعصاب
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
