Iranian Journal of Physiology and Pharmacology
مجله فیزیولوژی و فارماکولوژی ایران
Ir J Physiol Pharmacol
Medical Sciences
http://ijpp.phypha.ir
1
admin
2588-4042
2588-4050
8
14
8888
13
fa
jalali
1400
6
1
gregorian
2021
9
1
5
online
1
fulltext
fa
معرفی یک روش بهینه تخلیص DNA ژنومی توکسوپلاسما گوندی از مغز موش صحرایی جهت افزایش کارایی تشخیص عفونت توکسوپلاسما
Introducing an optimized method for purifying Toxoplasma gondii genomic DNA from rat brain to increase diagnosis efficiency of Toxoplasma infection
علوم اعصاب
Neuroscience
پژوهشي اصیل
Original Research
<div style="text-align: justify;"><span style="font-size:16px;"><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;">زمینه و هدف: </span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;">استخراج </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">DNA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"> ژنومی <em>توکسوپلاسما گوندی</em> از مغز موش صحرایی به ­دلیل میزان ناچیز آلودگی و چربی زیاد مغز چالش برانگیز است. واکنش کمی زنجیره­ای پلیمراز در زمان واقعی (</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">RT-qPCR</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;">) علیرغم تشخیص مقادیر ناچیز ژن هنوز با نتایج منفی-کاذب همراه است. ما با تغییر روش استخراج </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">DNA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"> از بافت مغز موش توانستیم تعداد موارد منفی-کاذب آلودگی به <em>توکسوپلاسما گوندی</em> را کاهش دهیم.</span></span><br>
<strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;">روش­ها: </span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;">از </span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;">مغز یازده موش (نر ویستار) آلوده به سوش تهران انگل توکسوپلاسما (در هفته هشتم آلودگی ) و سه موش غیر­آلوده استفاده شد. جهت تخلیص </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">DNA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"> بجای 20 میلی­گرم مغز (روش معمولی) کل مغز استفاده شد. میزان آنزیم پروتئیناز کا دو ­برابر و مدت انکوباسیون شش­ برابر روش معمول شد. سپس میزان </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">DNA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"> نمونه­ها با روش </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">RT-qPCR</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"> اندازه­گیری شد.</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"></span></span><br>
<strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;">یافته­ها و نتیجه­گیری: </span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;">با روش رایج از یازده موش آلوده فقط سه موش مثبت شدند در حالی­که با بهینه­سازی تخلیص </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">DNA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;">، نه موش مثبت تشخیص داده شدند.</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"></span></span></span><br>
</div>
<span style="font-size:16px;"> </span>
<strong>Background and Aim:</strong> Extraction of <em>Toxoplasma gondii</em> genomic DNA from rat brain is challenging due to low level of contamination and high fat content. Quantitative real-time polymerase chain reaction (RT-qPCR) is associated with false negative results despite detecting small amounts of the gene. By changing method of DNA extraction, we could decrease number of false negative results.<span dir="RTL"></span><br>
<strong>Methods:</strong> Brains of eleven male Wistar rats infected with Tehran strain of Toxoplasma parasite (with 8 weeks of parasite infection) and three uninfected rats were isolated. The whole brain was used to purify DNA instead of 20 mg brain in the conventional method. Amount of protein kinase was doubled and the incubation period increased to 6 times. Then DNA of the samples was measured by RT-qPCR.<span dir="RTL"></span><br>
<strong>Results and Conclusion: </strong>Only three of the eleven infected rats were infection positive by the conventional method, while nine mice were positive by the optimizing method.<br>
‎
تخلیص DNA, واکنش کمی زنجیرهای پلیمراز, REP-529
DNA extraction, RT-qPCR, REP-529
233
238
http://ijpp.phypha.ir/browse.php?a_code=A-10-298-4&slc_lang=fa&sid=1
Setayesh
Yasami-Khiabani
ستایش
یاسمی خیابانی
10031947532846004652
10031947532846004652
No
روه انگل شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
Samira
Choopani
سمیرا
چوپانی
10031947532846004653
10031947532846004653
No
گروه فیزیولوژی و فارماکولوژی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
Jalal
Babaie
جلال
بابایی*
10031947532846004654
10031947532846004654
No
روه انگل شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
Majid
Golkar
مجید
گل کار
10031947532846004655
10031947532846004655
No
روه انگل شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
Mohammad
Sayyah
محمد
سیاح
10031947532846004656
10031947532846004656
Yes
گروه فیزیولوژی و فارماکولوژی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران