fa تهیه آنتی بادی پلی کلونال علیه پروتئین فعال کننده ی سلول های B سایر موارد Others... پژوهشي اصیل Original Research <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:">زمینه و هدف:</span></b><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"> <span style="color:black">پروتئین فعال&shy;‌کننده&shy;ی سلول&shy;های </span></span><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">B</span></span></span><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"> (</span></span><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">BAFF</span></span></span><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black">) عضوی مهم از خانواده&shy;ی فاکتور نکروزدهنده تومورها می&shy;باشد</span></span><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">.</span></span></span><span b="" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"> بیان بیش از اندازه‌&shy;ی این پروتئین در برخی بیماری&shy;های خودایمنی و سرطان&shy;ها مشاهده شده است بنابراین این پروتئین می&shy;‌تواند به&shy;‌عنوان یک نشانگر تشخیصی و نیز یک هدف درمانی احتمالی مورد استفاده قرار گیرد. هدف مطالعه حاضر تولید پلی&shy;‌کلونال آنتی‌&shy;بادی شتری برای شناسایی بخش خارج&shy;‌سلولی پروتئین </span></span><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">BAFF</span></span></span><span b="" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"> می‌&shy;باشد.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:">روش&shy;‌ها</span></b><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:">: <span style="color:black">سازه ژنی بیانی حاوی بخش خارج&shy;‌سلولی پروتئین </span></span><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">BAFF</span></span></span><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"> انسانی تهیه و به باکتری اشرشیاکولی (</span></span><i><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">E.coli BL21 </span></span></span></i><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">(DE3)</span></span></span><i><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black">) </span></span></i><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black">منتقل شد. بیان این پروتئین توسط</span></span> <span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black">ایزوپروپیل تیوگالاکتوزید القاء و تخلیص با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی </span></span><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">-NTA</span></span></span><span b="" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"> نیکل انجام شد. پروتئین به صورت زیرجلدی در چند مرحله به همراه ادجوانت فروند به شتر تزریق شد. عملکرد آنتی‌&shy;بادی های پلی&shy;‌کلونال در شناسایی پروتئین </span></span><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">BAFF</span></span></span><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"> سرم جدا شده شتر با تست&shy;های الایزا، وسترن بلاتینگ و فلوسایتومتری بررسی شد.</span></span><span lang="FA" style="font-family:"B Mitra""></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:">یافته‌ها: </span></b><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black">ایمن‌&shy;سازی شتر پس از تزریق پروتئین </span></span><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">BAFF</span></span></span><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"> نوترکیب با استفاده از تست الایزا اثبات شد. تست&shy;های فلوسایتومتری وسترن بلات نشان داد که آنتی&shy;‌بادی پلی&shy;‌کلونال حاصله قادر به شناسایی پروتئین در سطح سلول می&shy;‌باشد.</span></span><span lang="FA" style="font-family:"B Mitra""></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:">نتیجه‌گیری:</span></b><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"> <span style="color:black">باتوجه&shy; به نتایج بدست آمده، آنتی‌&shy;بادی پلی&shy;‌کلونال حاصل از سرم شتر قادر به تشخیص و اتصال اختصاصی به پروتئین </span></span><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">BAFF</span></span></span><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"> بوده و قابلیت استفاده به&shy;‌عنوان یک عامل تشخیصی و درمانی را دارد.</span></span><span b="" lang="FA" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><span lang="FA" style="font-size:5.0pt"><span b="" mitra="" style="font-family:"><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span></span>‌ <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:150%"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Background and Aim: </span></span></span></b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">B-cell activating factor (BAFF) belongs to the tumor necrosis factor (TNF) superfamily and plays a critical role in B-cell survival and differentiation. Overexpression of BAFF has been linked to autoimmune diseases and B-cell malignancies. The biologically active segment of this protein is a soluble domain, making it a promising target for antibody-based therapies. This study aimed to develop a polyclonal camel antibody capable of detecting BAFF on cell surfaces.</span></span></span></span><b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span style="font-family:"Times New Roman","serif""></span></span></span></b></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:150%"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Methods: </span></span></span></b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">An expression vector, pET22b, containing the extracellular domain of the BAFF protein (NM_001145645.2), was constructed and introduced into Escherichia coli BL21 (DE3) using the calcium chloride heat shock method (CaCl2). Subsequently, the recombinant protein was induced using 1mM IPTG and protein purification was carried out with Ni2⁺&ndash;NTA resin. A 9-month-old female <i>Camelus dromedaries</i> was immunized with purified recombinant BAFF protein (rBAFF) mixed with Freund&#39;s adjuvant. Following immunization, the isolated polyclonal antibody was assessed using ELISA, western blotting, and flow cytometry to detect rBAFF protein.</span></span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span style="font-family:"Times New Roman","serif""></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:150%"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Results: </span></span></span></b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">The study confirmed the successful preparation of recombinant BAFF protein and the effectiveness of camel immunization and purification processes. The isolated polyclonal antibody demonstrated the ability to identify recombinant BAFF proteins in ELISA and western blot tests. Flow cytometry demonstrated its capacity to detect BAFF protein on cell surfaces.</span></span></span></span><b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span style="font-family:"Times New Roman","serif""></span></span></span></b></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:150%"><span style="text-autospace:none"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Conclusion: </span></span></span></b><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">Given the significance of diagnosing and developing novel adjuvant treatment methods for autoimmune diseases and cancer, this study&#39;s findings support the potential use of polyclonal antibodies targeting the BAFF antigen as valuable tools for these purposes.</span></span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:150%"><span style="font-family:"Times New Roman","serif""></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span style="font-size:10.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black"></span></span></span></b></span></span></span></span> آنتی ­بادی, پروتئین فعال کننده­ی سلول­های B , پلی­ کلونال آنتی­ بادی, شتر B-cell activating factor, Camel, Heavy chain antibody, Polyclonal antibody 197 205 http://ijpp.phypha.ir/browse.php?a_code=A-10-592-3&slc_lang=fa&sid=1 Rasoul Mardani-Jouneghani رسول مردانی جونقانی 10031947532846006228 10031947532846006228 No Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران 2. بخش بانک سلولی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Shiva Irani شیوا ایرانی 10031947532846006229 10031947532846006229 No Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران 2. بخش بانک سلولی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Mahdi Habibi-Anbouhi مهدی حبیبی انبوهی 10031947532846006230 10031947532846006230 No National Cell Bank of Iran, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش بانک سلولی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Mahdi Behdani مهدی بهدانی 10031947532846006231 10031947532846006231 Yes Biotechnology Research Centre, Venom and Biotherapeutics Molecules Laboratory, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، آزمایشگاه ونوم و بیومولکول‌های درمانی، انستیتو پاستور ایران، ایران، تهران